1．撤血試驗
①孕酮撤血試驗：撤藥後出血者，提示病變在下丘腦-垂體；
②雌激素撤血試驗：撤藥後無出血者，提示病變部位在子宮。
2．卵巢功能的測定
測定卵巢功能的方法有：基礎體溫、子宮頸粘液檢查、陰道脫落細胞塗片，測定血、尿中雌激素和孕激素水平等。
通過卵巢功能的測定可以鑑別閉經的原因是在靶器官或在卵巢或卵巢以上的某個環節。當卵巢有排卵功能時其閉經原因不在卵巢而可能在子宮或陰道，從而排除垂體性閉經。瞭解卵巢功能有助於指導用藥。
3．垂體功能測定
臨牀上FSH增高的意義較大，如FSH高於40IU/L提示卵巢功能已衰竭。如LH低於51U/L表示促性腺激素功能不足。若FSH和LH都降低，常提示垂體更高中樞功能低落。24小時尿FSH的排出量大於52．8小白鼠子宮單位，則病因在卵巢。血清PRL測定，本徵約有20％的病人有高泌乳素血癥存在。
4．黃體生成激素釋放激素（LRH）興奮試驗
測垂體對下丘腦LRH的反應。如果反應在基數的3倍左右者說明垂體功能正常而病因在下丘腦。基數低、反應差或無反應者，病因在垂體。其中部分是由於垂體在長期抑制狀態下出現的惰性反應。故一次注射LRH無反應或反應遲鈍，必須重複試驗，經多次試驗均無反應時，纔有較大的臨牀意義。
5．其他診斷措施
如顱內蝶鞍區攝片、CT掃描及核磁共振以及眼底檢查等，以摒除垂體腫瘤；24小時尿17-OHCS、17-KS測定和甲狀腺功能測定等；腹腔鏡檢查，可直接觀察子宮、輸卵管和卵巢的形態與病變情況。
