抗病毒藥物達菲被人們視爲H7N9病毒的“剋星”，但復旦大學上海醫學院醫學分子病毒學重點實驗室主任、上海市（復旦大學附屬）公共衛生臨牀中心兼職教授袁正宏研究員領銜的應急檢測與生物安全實驗室新發傳染病研究團隊，近日通過一項“跟蹤”研究證實：個別患者在達菲抗病毒治療19天后仍在其咽拭子標本中檢測到H7N9病毒的重要組成部分“核酸”，這表明該病毒已出現基因突變和耐藥趨勢。5月29日，該研究成果在線發表在國際頂尖醫學雜誌《柳葉刀》（Lancet）上，引起世界同行高度關注。
爲指導人感染H7N9禽流感病例病情判斷、臨牀治療等工作，袁正宏領銜的研究團隊承擔了檢測收治患者標本中H7N9病毒“核酸”載量的重要任務。該團隊收集了病人在治療過程中多個時間點的咽拭子、血液、尿液和糞便標本，同時使用先進的、自行設計的熒光定量RT-PCR方法對上述標本中的H7N9流感病毒“核酸”載量進行了定量檢測，並對14例患者進行了病毒載量與病情嚴重程度的相關性分析。結果發現，病症相對較輕的患者在達菲治療中，其咽拭子的病毒載量顯著下降並較快轉陰;重症患者，特別是在後期需要依靠人工肺治療的患者，其咽拭子的病毒核酸載量在達菲治療過程中呈持續陽性，甚至載量進一步升高的罕見現象，並有個別患者在經達菲治療19天后仍在其咽拭子標本中檢測到“核酸”。
爲解釋上述不尋常現象，課題組對H7N9禽流感病毒的兩個最重要蛋白HA和NA，即患者標本中的這兩個病毒基因序列進行擴增研究和多態性分析，結果發現兩例重症病例在抗病毒治療過程中其體內H7N9毒株的神經氨酸酶（NA）“292位氨基酸”從R（精氨酸）突變爲K（賴氨酸）。更重要的是，該實驗室運用先進的“Q-PCR單核酸多態性分析法”分析後有了更爲重大的發現：病人標本中“292R毒株”竟然出現了逐漸被“292K毒株”取代的過程。該結果提示：這一突變毒株的出現可能與達菲治療效果不佳有關。
“NA R292K”的突變曾出現在季節性H3N2流感病毒上，後研究證明該病毒對達菲耐藥。該團隊在上海地區最早出現的H7N9病毒中也發現存在這一突變，但當時並不清楚其臨牀意義。本研究的重大意義在於首次將“NA 292位”氨基酸的“R/K突變”與臨牀達菲療效不佳和不良預後聯繫起來，並表明耐藥的基因突變可以在臨牀抗病毒治療過程中被誘導產生，即病毒在藥物“壓力”下，會促使患者體內病毒產生變異突變，從而導致H7N9禽流感病毒已呈現耐藥性。香港大學微生物學家裴偉士教授的科研團隊參與了該耐藥基因的發現和確認工作。
上海市H7N9禽流感防治專家組組長、微生物學專家聞玉梅院士認爲，該研究結果說明，達菲治療依然對絕大部分患者有效，一旦確診應儘早治療;同時提示在達菲治療前和治療過程中必須要對病毒載量和耐藥“基因位點”進行密切監測，及時調整治療方案，以提高救治成功率;此外，加快新藥研發顯得尤爲重要。
